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非瘟感染后存活下来的猪会长期带毒吗?

   日期:2019-05-30     评论:    

非洲猪瘟病毒,根据其致病力的不同,可分为高致病性、中等致病性和低致病性三类。高致病性毒株能造成严重的急性病症,并在感染后4-15天达到90-100%的死亡率;中等毒性的毒株死亡率在30-70%;低致病性毒株的死亡率在10-30%。

中低等级感染后存活下来的猪只是否长期带猪并向外界排毒,这是长期争论的焦点。德国弗里德里希·勒夫勒研究院诊断病毒所的研究人员给出了自己的实验结论。

实验设计

实验中,研究人员选取了36头非瘟病毒检测阴性、非瘟抗体检测阴性的5-6月猪,其中30头作为攻毒猪,用分离于荷兰的中等毒性的 Netherlands’86 毒株通过病毒培养上清液滴鼻的方式进行接种感染,称为C型猪。C型猪随机分为三组,每组10头,分别关在一个猪舍三个独立的大栏中。

剩余6头不接种病毒,用于在C型猪感染后期与其同栏饲养,检测感染后期C型猪的感染能力,称为S型猪。

感染后,C型猪每天检测直肠温度并观察临床现象。如果温度两天以上达到40度,则确认为发烧。临床观测症状包括:活泼度、耐受度、呼吸频率、步态、皮肤、眼睛、脸颊和采食量等,并建立评分系统。

为了评判感染后猪只病毒血症、排毒和免疫应答的程度,在感染第3,7,10,14,20,29,42,48,63和91天抽取前腔静脉血进行化验。

同一时间,为了检测感染猪只排毒情况,用棉签拭子收集包括粪便样品、唾液和口咽部样品在内的拭子样品,用作qPCR检测。从105天到126天,拭子样品每周收集一次。

99天后,幸存的19头C型猪与6头S型猪混养,每组放2头S型猪,并按原本实验设计收集各类检测样品。164/165天后,所有存活的C型猪和S型猪解剖采集组织样品检测,包括:扁桃体、唾液腺、脾脏、肺脏和下颌淋巴结,以及腹股沟、肝、肾、肠胃、肺等多处淋巴结。

所有拭子样品、血液样品和组织样品中病毒的都要用实时定量PCR检测,抗体用ELISA检测。为了检测血液和组织中有活性的病毒,应用血细胞吸附实验检测。

实验结果

1

临床症状

中等毒性的 Netherlands’86毒株感染后的C型猪表现出多种不同临床症状,包括急性致死、延迟致死、慢性病症,以及最终恢复等。

多数猪只在感染4-6天,出现发烧症状。在急性死亡的猪只身上,临床症状表现为萎靡不振、结膜炎、不采食、便秘、皮肤变红,特别在耳朵和眼睛区域;发烧41.8℃,一些猪在高烧5天后出现中枢神经障碍症状。急性症状平均持续8-10天。该阶段死亡的猪,解剖发现多个脏器出血:外周淋巴结肿胀和出血,肾脏出血点和肺部水肿。

2

病毒检测

所有30头C型猪在滴鼻感染一段时间后,抽血做qPCR检测都检出阳性,第一次检测出阳性的时间在感染后3-21天之间。在第10和14天,血液中病毒含量最大。在感染第42天,6头C型猪第一次qPCR检测结果呈阴性,第48天7头,第63天10头结果阴性。到了第91天,尽管52%的C型猪仍旧阳性,但病毒载量降低了(Cq 28-30)。

同时间的30头C型猪血样HAT检测(HAT检测阳性说明ASFV有感染活性)发现,血清HAT检测结果与血液PCR结果一致,大多数HAT检测阳性结果出现在14天感染。有趣的是,HAT第一例阴性结果出现在29天,随后大量存活的C型猪出现HAT阴性,到了第63天所有存活的C型猪检测阴性。这可能表明存活的非瘟感染猪丧失感染能力要早于核酸检测阴性结果出现。

棉签拭子采样检测结果显示感染ASFV的C型猪排毒情况。口腔拭子样品qPCR检测在感染第3天出现阳性结果(两头猪)。在第7和10天,绝大多数的口腔拭子样品出现阳性(Cq在30-41间)。从第14天开始,阳性拭子样品数量开始减少,到第21和29天,只有1个样品呈现阳性,到了第42天,所有的口腔拭子样品呈现阴性。唾液样品与口腔拭子结果一致,在7-10天出现阳性结果高峰,在14天开始减少。不同的是,唾液样品病毒载量更多,持续时间更长。粪便样品中的病毒含量更低,最后的阳性样出现在第29天。

ELISA检测感染猪抗体情况。第一批可疑结果(5头)和阳性结果(13头)在感染后第13天出现,随后抗体阳性猪数量和抗体阻断率稳定增加(增大)。到了第29天,所有C型猪抗体显示阳性(阻断率在74-98%),到了第63天,所有C型猪阻断率达到99-100%。存活的C型猪直到实验结束仍表现阳性,但是产生的抗体是ASFV p73蛋白特异性的抗体,但不能产生有中和作用的抗体。

6头S型猪从实验开始至结束,未表现非瘟感染临床症状,qPCR检测、HAT检测和ELISA检测结果均呈阴性,表明在第99天,S型猪和感染非瘟后存活C型猪混养,C型猪已不具备感染能力。

综上,中等毒性的Netherlands’86毒株感染后的猪只在4-6天内既出现临床症状,并且严重程度各异,包括急性致死、延迟致死、慢性病症,以及最终恢复等。在感染几天(最早3天)后便出现病毒血症,可通过PCR、HAT试验等方法检测,同时开始出现排毒,第3天口腔及唾液中就可检测病毒,粪便中稍晚;ASFV抗体(p73特异性抗体)出现更晚。然而存活下来的感染猪只并不会长期带毒,而是随着时间的推移,病毒载量逐渐降低,并最后完全清除。HAT试验阴性结果最先出现,随后qPCR结果也将转为阴性,健康猪只与感染99天后的存活感染猪混养也不会出现感染。但存活下来的感染猪并不会产生有效的中和抗体。

 
 
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